在父亲去世后，少年收到了七只神秘的蔷薇少女，她们声称要进行一场名为“蔷薇婚礼”的残酷游戏。
高中生樱田纯在一次车祸中失去了父亲，之后便能看到常人无法看到的“境界线”。某天，他收到了父亲生前寄出的包裹，里面是七只栩栩如生的人偶——蔷薇少女。当他触碰到核心人偶“水银灯”时，契约成立，他被拖入了一个名为“N之领域”的时空缝隙。这里正在进行一场“蔷薇婚礼”，获胜者将成为完美少女“爱丽丝”，而失败者将永远消失。纯必须作为媒介，与水银灯并肩作战，对抗其他六位性格迥异的人偶少女。随着战斗深入，纯发现这场游戏与父亲的死亡有着千丝万缕的联系。
作为系列重启之作，《序曲》在画质上有了质的飞跃，战斗场面华丽流畅。虽然人设偏向萌系，但内核却极其黑暗压抑，探讨了“爱”与“执念”的边界。水银灯的反派魅力在这一部里得到了极致展现。
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